簡(jiǎn)單介紹下細胞爬片的使用步驟

發(fā)布日期： 2018-07-30

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　　簡(jiǎn)單介紹下細胞爬片的使用步驟

　　細胞爬片步驟

　　(1)儲存液：1:10稀釋液可以保存在4℃里，三個(gè)月內仍然可以使用。稀釋、儲存和吸取多聚賴(lài)氨酸要使用塑料制品。

　　工作液：0.1%(w/v)PLL，用移液槍吸取0.3ml PLL＋3ml無(wú)菌去離子水，混勻放于10ml無(wú)菌塑料離心管中。封口模密封后4℃存放。

　　(2)無(wú)菌處理：PLL不可以高溫消毒，故應過(guò)濾除菌分裝于無(wú)菌處理的細胞凍存管內，1ml/管，封口模密封，4℃保存。另外，準備無(wú)菌去離子水50ml。

　　細胞爬片方法與技巧

　　爬片的準備：

　　1、爬片可用一般的蓋玻片，也可用爬片；

　　2、應用蓋玻片，可根據自己的需要剪裁成合適的大小，以備置于6孔板、12孔板或24孔板；

　　3、將剪裁好的爬片，置于濃硫酸中浸泡并過(guò)夜，第二天先用自來(lái)水沖洗20遍，再用三蒸水沖洗3遍（個(gè)人認為主要目的是沖洗干凈就可以了），放在飯盒或者培養皿（一定是玻璃的哦，要不然就„„）中烘干后進(jìn)行高壓消毒。

　　培養板的準備：

　　1、泡酸過(guò)夜

　　2、沖洗，烘干（1、2步驟與前大致相同）

　　3、放入超凈工作臺用紫外線(xiàn)照1～2小時(shí)就可以用了（在照之前可以將爬片一并放入，若細胞貼壁能力不強，可經(jīng)多聚賴(lài)氨酸浸片后放入。貼壁能力強的話(huà)，就可以省略了，進(jìn)行紫外線(xiàn)消毒）

　　注：此步自己的經(jīng)驗是爬片可以先浸入消毒后的PBS內，緊接著(zhù)放入培養板內。目的：

　　浸過(guò)PBS的爬片依靠表面的液體，可以用培養板孔底貼和緊密，以利于細胞長(cháng)到爬片上。（自己剛開(kāi)始做的時(shí)候，經(jīng)常就是細胞全都長(cháng)在了爬片與培養板之間，爬片上細胞罕見(jiàn)。）

　　細胞爬片：

　　1、胰酶消化細胞后計數

　　2、根據自己的需要選擇合適的細胞密度種入培養板內即可

　　3、第二天即可進(jìn)行干預措施

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