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hot news嚴格使用一次性細胞培養瓶
一次性細胞培養瓶蓋不應擰得太緊,以保證氣體交換。HEPES是一種非離子緩沖液,在pH 7.2-7.4范圍內具有較好的緩沖能力,但是非常昂貴,在高濃度時(shí)對一些細胞可能有毒。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉(0.34g/L)共用,以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。在這種培養條件下,一次性細胞培養瓶的蓋子應擰緊,以防止培養液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。大多數培養液中含有酚紅作為pH指示劑,酸性培養液呈橙黃色,堿性培養液呈深紅色。
溫馨提示:請嚴格按照此步驟操作,否則可能會(huì )出現一次性細胞培養瓶中細胞生長(cháng)空白區域,即所謂的“生長(cháng)空洞”。多數用戶(hù)使用的不是的預包被一次性細胞培養瓶,而是普通的一次性細胞培養瓶或培養皿,其表面環(huán)境并不利于無(wú)血清培養環(huán)境下的間充質(zhì)干細胞貼壁。37℃放置5-10分鐘,可讓培養基中的促貼壁物質(zhì)更好地與一次性細胞培養瓶底部結合,使得間充質(zhì)干細胞的貼壁能力增強,降低“生長(cháng)空洞”出現的概率。
細胞消化:將一次性細胞培養瓶豎立放置,吸走培養基,如果培養基中的脫落細胞較多,說(shuō)明細胞現在很容易脫落,只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%),來(lái)回輕微晃動(dòng)培養瓶直到細胞*脫落,加入10mlMEM(10%杭州四季青胎牛血清),混勻,不能吹打,分裝2瓶,如果細胞沒(méi)長(cháng)滿(mǎn)就脫落,則只需加入5mlMEM,不分裝。如果培養瓶中的細胞貼壁較牢固,培養基上清沒(méi)有細胞脫落碎片,且細胞長(cháng)滿(mǎn)達到80%以上,吸走培養基,加入5ml的PBS+EDTA(0.02%),迅速輕微晃動(dòng),豎立培養瓶,吸走,加入1ml0.05%胰酶,37度消化不超過(guò)3min,細胞*消化脫壁,取出加入10ml培養基輕微吸打混勻,分裝2瓶。
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