細胞培養專(zhuān)題——6孔板接種和換液

　?。?）問(wèn)：我的細胞傳代很正常，但一種到六孔板里（不管加藥和對照），總有兩三個(gè)孔（隨機）細胞長(cháng)得不好，很小，像破碎了。有人遇到過(guò)這種情況嗎？到底是啥原因呢？請各位指點(diǎn)

　　答：可能跟你加液的溫度有關(guān)。如果你細胞剛剛拿出來(lái)?yè)Q液加液，培養基也是從4度冰箱拿出來(lái)不久，很容易細胞就會(huì )凍死了。建議你最好把培養基先在培養箱里邊孵育15min先。

　　另外，跟你細胞的生長(cháng)狀態(tài)也有關(guān)。加藥之前的細胞可以用高點(diǎn)的血清濃度培養。保證細胞狀態(tài)良好。

　　或者放在37度水浴鍋里孵育也可以，或者是培養板本身的問(wèn)題，你再換換其他培養板試試看。再有可能就是細胞狀態(tài)問(wèn)題了，種板時(shí)的血清濃度調高試一下

　?。?）問(wèn)：最近幾天，我用六孔培養板接種細胞，培養24小時(shí)后更換培養基，在更換培養基之前，顯微鏡觀(guān)察到細胞貼壁，狀態(tài)非常的好，更換了培養基后，立即用顯微鏡觀(guān)察，發(fā)現每個(gè)孔中都近乎有一半的細胞表現出近乎死亡的狀態(tài)。細胞變得非常小，產(chǎn)生大量的碎片，而另一半的細胞一切正常，異常細胞與正常細胞之間存在一條分水嶺，上半個(gè)圓是好的，下半個(gè)圓就不好，這是怎么一回事？

　　答：你可以看一下是不是培養板沒(méi)放水平。有一回我也出現過(guò)這種情況。你的培養液如何，如果培養液過(guò)期，細胞就不會(huì )貼壁。換一點(diǎn)新配制的培養液試一試。我也經(jīng)常碰到，我想可能是板的問(wèn)題，換一個(gè)牌子的板或換用培養瓶就沒(méi)問(wèn)題了。不知樓主所需換液的培養板多不多，換培養基的時(shí)候如果沒(méi)有注意風(fēng)機的影響，特別是所需換液的培養板很多時(shí)，容易使細胞因風(fēng)吹失水而干縮破裂。如果如此，換液時(shí)應該逐個(gè)培養板進(jìn)行，別怕浪費吸管，注意操作的效率！