細胞培養過(guò)程中遇到的常見(jiàn)問(wèn)題及解決的辦法

發(fā)布日期： 2022-09-23

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　　細胞培養過(guò)程中遇到的常見(jiàn)問(wèn)題及解決的辦法：

　　1、培養液pH值變化太快：

　?。?）CO2張力不對;培養瓶蓋擰得太緊;NaHCO3緩沖系統緩沖力不足；培養液中鹽濃度不正確。細菌、酵母或真菌污染。按培養液中NaHCO3濃度增加或減少培養箱內CO2濃度，2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對應CO2濃度為5％到10％。

　?。?）改用不依賴(lài)CO2培養液。松開(kāi)瓶蓋1/4圈。加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度。在CO2培養環(huán)境中改用基于Earle’s鹽配制的培養液，在大氣培養環(huán)境中培養改用Hank’s鹽配制的培養液。丟棄培養物或用抗生素除菌。

　　2、培養液出現沉淀，但pH值不變：

　　用洗滌劑清洗后殘留磷酸鹽將培養基成分沉淀下來(lái)。冰凍保存培養液。用去離子水反復沖洗玻璃器皿，然后除菌。將培養液加熱到37℃，搖動(dòng)使其溶解如沉淀仍然存在，丟棄培養液。

　　3、細胞培養液出現沉淀，同時(shí)pH發(fā)生變化：

　　細菌或真菌污染//丟棄培養物或用抗生素除菌。

　　4、培養細胞不貼壁：

　　胰蛋白酶消化過(guò)度；支原體污染；培養液中無(wú)貼壁因子?？s短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度。分離培養物，檢測支原體。清潔支架和培養箱。如發(fā)現支原體污染，丟棄培養物。

　　5、懸浮細胞成簇：

　　細胞培養液中含鈣、鎂離子。支原體污染。蛋白酶過(guò)度消化使得細胞裂解釋放DNA。用無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細胞，輕輕吹吸細胞獲得單細胞懸液。分離培養物，檢測支原體。如發(fā)現支原體污染，丟棄培養物。用DNase處理細胞。

　　6、原代細胞培養物污染：

　　原代培養組織在進(jìn)入培養前已污染。培養前用含高濃度抗生素的平衡鹽溶液反復沖洗組織。

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