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超濾離心管使用前需了解哪些內容呢

發(fā)布日期: 2023-03-16
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離心管是一個(gè)簡(jiǎn)單的可以承受高轉速壓力的管子,比如離一些樣品,分離出上清沉淀。超濾離心管會(huì )有一個(gè)類(lèi)似于內管和外管的兩個(gè)部分,內管中是帶有一定分子量的膜,當高速離心時(shí),分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即內管中),就是超濾的原理.常用于濃縮樣品。
選擇合適的超濾管。通常應截留分子量不應大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說(shuō)明書(shū),注意超濾膜對各種化學(xué)物質(zhì)的耐受程度有所不同。新買(mǎi)來(lái)的超濾是干燥的,使用前加入超純水,水量**過(guò)膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鐘。然后將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過(guò)管頂的白線(xiàn)為準。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。
超濾離心管是否要預處理:
超濾離心管通常不需要預處理即可使用,不過(guò)對于蛋白質(zhì)樣本處理,特別是較稀的蛋白質(zhì)溶液來(lái)說(shuō)(<10ug/mL),用超濾膜濃縮回收率常常是不定量的。雖然PES材料使非特異吸附*小化,但是,某些蛋白,特別是稀的時(shí)候,會(huì )有問(wèn)題。非特異結合的程度隨著(zhù)個(gè)別蛋白結構的不同而不同。含有帶電的或者疏水結構域的蛋白質(zhì)更易于不可逆結合到不同表面。對超濾離心管表面做鈍化預處理可降低蛋白質(zhì)在膜表面的吸附性損失,大多數情況下,在濃縮稀蛋白溶液之前預處理柱子可以提高回收率,因為溶液可填滿(mǎn)膜和表面暴露的空白蛋白吸附位點(diǎn)。鈍化的方法是預先用*高容積的鈍化溶液預浸泡柱子1小時(shí)以上,蒸餾水沖洗柱子,再用蒸餾水離心一次以除去可能殘留在膜上的鈍化溶液。注意鈍化處理后別讓膜干了。如果要留待以后使用,需要加無(wú)菌蒸餾水保持膜濕潤。 
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