細胞爬片又名爬片,就是讓玻片浸在細胞培養基內,細胞在玻片上生長(cháng),主要用于組織學(xué),免疫組織hua學(xué),冰凍切片,細胞涂片,原位雜交等,細胞爬片是根據實(shí)驗研究的需要,使貼壁細胞在一定的固相表面(如蓋玻片、載玻片)上貼壁生長(cháng)而獲得的一種體外細胞實(shí)驗材料。
我們在做免疫熒光(IF),激光共聚焦(Confocal),凋亡檢測(TUNEL)時(shí),免不了要制備細胞爬片,爬片質(zhì)量*決定了后拍照的質(zhì)量以及實(shí)驗數據的性。
在醫學(xué)生物研究中,免疫熒光檢測等需用到細胞爬片?,F有的細胞爬片多采用表面平整、光滑的透明玻璃玻片。但在做免疫熒光檢測時(shí),為了節約抗體,需免疫組化筆在爬片上進(jìn)行范圍的圈定,將抗體加入劃定區域,免疫組化筆中的疏水成分阻滯抗體溢出所圈定的范圍,從而達到節約抗體的目的。
但在實(shí)際使用過(guò)程中,會(huì )有大量免疫組化筆的成分混入目標范圍內,且線(xiàn)條粗大,造成樣品數量減少,同時(shí)混入目標范圍內的免疫組化筆的成分容易造成背景噪聲及雜質(zhì)影響免疫熒光的結果,嚴重影響實(shí)驗結果的準確。
爬片的準備:
1、爬片可用一般的蓋玻片,也可用爬片;
2、應用蓋玻片,可根據自己的需要剪裁成合適的大小,以備置于6孔板、12孔板或24孔板;
3、將剪裁好的爬片,置于濃硫酸中浸泡并過(guò)夜,第二天先用自來(lái)水沖洗20遍,再用三蒸水沖洗3遍(個(gè)人認為主要目的是沖洗干凈就可以了),放在飯盒或者培養皿(一定是玻璃的哦,要不然就……)中烘干后進(jìn)行高壓消毒。
培養板的準備:
1、泡酸過(guò)夜
2、沖洗,烘干(1、2步驟與前大致相同)
3、放入超凈工作臺用紫外線(xiàn)照1~2小時(shí)就可以用了(在照之前可以將爬片一并放入,若細胞貼壁能力不強,可經(jīng)多聚賴(lài)氨酸浸片后放入。貼壁能力強的話(huà),就可以省略了,進(jìn)行紫外線(xiàn)消毒)
注:此步自己的經(jīng)驗是爬片可以先浸入消毒后的PBS內,緊接著(zhù)放入培養板內。目的:浸過(guò)PBS的爬片依靠表面的液體,可以用培養板孔底貼和緊密,以利于細胞長(cháng)到爬片上。